师弟，周末一起看电影呗，xxxx很不错，网评超高的。

哎~别提了，最近实验很不顺利，啥心情都没有了

什么情况？师姐很厉害，可以来解救你哦~

之前千辛万苦提的RNA又降解了，这已经是第八次啦，好心塞

就这事啊，我帮你搞定，我提RNA杠杠滴......

你是不是和上面的师弟有一样的苦恼，搞不定RNA这个磨人的小妖精」，经常出现辛辛苦苦提的RNA又降解了，质检又没通过的情况。为什么提的RNA总是不ζ　合格▆？ 今天小编就给大家梳理一下RNA提取时的注意事项，轻松帮你搞定傲娇的RNA分子，So easy~

为什么RNA易降解？

RNA容易降解◇有内因也有外因，从自身结构来㊣说RNA是单链□　分子，本身很不稳定，另外RNA分子2’位置上〖有游离的羟基，易形成2’，3’-环形磷◆酸盐中间产物，易分解。从外因来看RNase无处不在，并且RNase本身热稳定性高、不容易失∴活。RNase就像¤顽强的小强，怎么打都不死。

RNA提取注意事项

Point 1：材料的取用与保卐存

?取用原则：“现用现取”，材料离体后尽快进行RNA提取。

?保存条件：液氮、-80℃冰箱、干冰。

?保存效果：液氮> -80℃冰箱>干冰。

?样品分装：按实验需求最小量保存多份，避免反∑　复冻融。

【RNAlater是一种液态无毒的动物组织◥保存试剂。它能迅速渗入组织细胞中，通过高效的抑制RNase活性保护非▼冷冻细胞RNA，使其免受降解，从而〖使得在获得组织样品后，不必马上处理↙样本，也不必㊣将样本冷冻在液氮之中，而更方便后续实验操作。使用组织RNA保护液，可免】去使用液氮或超低温冰箱的不便，而且把不同批次的组织标¤本存放在该保护液中，能立即终止并○固定 RNA 表达的时序变⊙化，可以减少实验组间误差。

RNAlater可广泛应用于多种脊椎动物样本，包括脑、心、肾、脾、肝、肺。新鲜非冷冻组∩织按1:10比例浸入Buffer RNAlater后，样品可在常温保存1周、37℃保存1天，4℃至少保存1个月；组织4℃浸泡处理后可以在-20℃或-80℃长期保存。】

Point 2：实验器◤具使用

在RNA提取过程★中凡是与RNA接触到的器皿都必须是RNase-free的，具体可通过以下两种方式获得：

DEPC处理失活RNase：用含有DEPC的◣水浸泡实验器皿失活RNase，然后进行高温灭菌。

直接购买RNase-free的实验耗材ㄨ：适用于经费充足的实验室，放心可靠。

【RNase Eraser是一款新型RNase清除剂，能够快速有效的去除空气 、固体表面RNase的污染，保证RNA相关实验的顺〇利进行】

Point 3：提取方『法选择

RNA提取最常用的是TRIzol法和试剂●盒法，二者∑　各有优劣，可根据研究目的进行选择。

试剂盒法：

优点：操作简单、入门容易，新手必备。

缺点：柱提取法提取的RNA有长度＠的局限性, 小RNA在提取过程中容易丢失。另外，不同的试剂盒适用物种不同，使用时需谨慎选♀择。

TRIzol法：

优点：提取成本ㄨ低，适用物种广泛，操作者可根据不同实验材料的特点灵活调整实验步骤达到最优的♀提取效果，适用于经验丰富的◣科研老司机。

缺点：操作步骤繁琐、耗时长。

植物总RNA提取№试剂盒	RE-0501T/1/2/3	5/50/100/200?preps
多糖多酚植物总RNA提取√试剂盒	RE-0502T/1/2/3	5/50/100/200?preps
动物组织/细胞总RNA提【取试剂盒	RE-0301T/1/2/3	5/50/100/200?preps
动物组织miRNA提取试剂盒	RE-0101T/1/2/3	5/50/100/200?preps
血清/血浆miRNA提取试剂盒	RE-0111T/1/2/3	5/50/100/200?preps
病毒RNA提取试剂盒	RE-0201T/1/2/3	5/50/100/200?preps

Point 4：实验人员操◤作

提取RNA时应配戴口罩和手套，避免皮肤上的RNase污染样品。

实验╱过程遵循操作快、加样准的原▽则。

建议提取经验不足的实验人员避免一次性操作几』十个RNA样品，容易造成不同样品间的平行性差，另外，操作时间增长也会增加RNA降解的风险。

Point 5：RNA实验环境搭∏建

最好搭建RNA专用的实验环境包括实验台和离心机等，减少不同实验环境下RNase的交〓叉污染。

避免将RNA长◎时间暴露于高温环境。通常情况下，RNA 分子自身常常发生折叠】形成稳定二级结构，避〓免被降解，高＠温环境有助于RNA分子二级结构的打开，使RNA变得不稳◥定，因此要避免。

为什么RNA品质很▂重要？

RNA降解后产生不同长度↑的片段，利用poly A富集方法◣进行建库，即使抓住了3’端poly A尾也无法获得〒完整的mRNA- 5’端，后续的测序≡数据也会因为降解而产生偏差。

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